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固氮酶檢測能夠直接反映固氮微生物的固氮能力 

發(fā)布時間: 2022-10-21  點(diǎn)擊次數(shù): 1933次
  在自然界中,固氮微生物可以在固氮酶的作用下,通過生物固氮(以自生固氮、共生固氮或聯(lián)合固氮的形式)將大氣中的分子氮轉(zhuǎn)化為氨,參與氮循環(huán)。研究固氮微生物不僅有利于氮肥的合理施用,而且有利于微生物肥料的發(fā)展。固氮酶檢測能夠直接反映固氮微生物的固氮能力。
  
  生物固氮是固氮微生物*的生理功能,由固氮酶催化。固氮酶活性的檢測對于生物固氮工程的研究具有重要意義。以乙炔還原法為基礎(chǔ),為研究人員提供了固氮酶活性、海藻固氮菌、土壤固氮酶活性和固氮酶檢測。
 
  

固氮酶檢測
 

 

  取適量樣品于帶有異丁基橡膠塞的密封瓶中,抽出部分空氣,注入等量的標(biāo)準(zhǔn)乙炔氣體,調(diào)節(jié)光照時間和溫度進(jìn)行培養(yǎng),培養(yǎng)后取密封瓶中的氣體進(jìn)行檢測。乙烯含量用外標(biāo)法定量,配置5種不同濃度的乙烯氣體進(jìn)行檢測。根據(jù)濃度和峰面積建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,每批樣品都要重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法采用標(biāo)準(zhǔn)樣品法進(jìn)行質(zhì)量控制。每10個樣品用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)乙烯氣體樣品進(jìn)行測試,同一樣品平行測試5次,計算準(zhǔn)確度和精密度,準(zhǔn)確度和精密度應(yīng)在20%以內(nèi)。
  
  1、檢測原理:乙炔還原法(固氮酶能將乙炔氣還原成乙烯氣)
  
  2、測試平臺:氣相色譜儀-氫火焰離子檢測器(GC-FID)
  
  樣品要求:
  
  1、土樣(≥8.0g/樣;如果待測含水量≥10.0g/個樣品),用干冰或冰袋運(yùn)輸。
  
  2、根瘤樣品(≥1.0g/樣品)在液氮中冷凍,在-80℃下儲存,在干冰中運(yùn)輸。
  
  3、細(xì)菌(≥15ml/樣品),無氮培養(yǎng)基活化,冰袋運(yùn)輸。
  
  固氮酶檢測實(shí)驗(yàn)方案:
  
  1、稱取約1.0g結(jié)節(jié)組織,放入20mL空瓶中。用注射器抽取2ml空氣后,用注射器注入2ml乙炔氣體。樣品中乙炔的濃度為10%。
  
  2、將瓶子放在30℃的恒溫水浴中60分鐘,避光。
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