可用作ELISA板的物質(zhì)很多,常用的是聚苯乙烯和聚氯乙烯,它們具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性。作為塑料,可制成各種形式。在ELISA測(cè)定過(guò)程中,它們作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng)。加之它們的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。專(zhuān)用于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱(chēng)為ELISA板,國(guó)際通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。
①聚苯乙烯ELISA板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號(hào)的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為 10ng/ml)包被 ELISA 板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測(cè)每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計(jì)算所有讀數(shù)的平均值。所有單個(gè)讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%。
②另一中是與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料聚氯乙烯。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯板的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,可切割,價(jià)廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時(shí)也略高。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,可用以下方法加以檢驗(yàn):用其它免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和一個(gè)典型的陰性標(biāo)本。將它們分別進(jìn)行一系列稀釋后,在不同的固相載體上按預(yù)定的 ELISA 操作步驟進(jìn)行測(cè)定,然后比較測(cè)定結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果判別最大,這種載體就是這一 ELISA測(cè)定的最合適的固相載體。
ELISA 板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特定的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量反應(yīng)板型的 ELISA 檢測(cè),包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。