小鼠白介素Elisa試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗小鼠IL-4抗體預(yù)包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體,經(jīng)過孵育,樣本中存在的IL-4與固相抗體和檢測抗體結(jié)合,形成免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。洗滌后,加入顯色底物,避光顯色。加入終止液終止反應(yīng),在450nm波長(參考校正波長540nm或570nm)測定吸光度值。
不了解小鼠白介素Elisa的操作步驟?看一眼就懂了!
1、標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可在小試管中進行稀釋。
2、加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7、溫育:操作同3。
8、洗滌:操作同5。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定:小鼠白介素Elisa以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。